Навіщо використовувати клітини BL21 для експресії білка? BL21 E. coli дають високі рівні білка через дефіцит двох ключових протеаз (lon і ompT). Це дозволяє досягти високого рівня внутрішньоклітинного накопичення гетерологічних білків, одночасно зводячи до мінімуму деградацію білка під час очищення.
BL21-SI має здатність експресувати білки під контролем або промотора РНК-полімерази T7, або промоторів lac і trc. Крім того, його генотип lon- і ompT- щоб мінімізувати деградацію експресованих білків.
BL21(DE3) The Штам експресії BL21(DE3). є одним із найбільш широко використовуваних штамів E. coli для експресії білка. Він має дві основні генетичні особливості, серед інших, необхідні для масової експресії бажаного кінцевого продукту клонованої рекомбінантної ДНК.
Найбільш поширеними векторами експресії є плазміди і віруси. Рішення про те, який вектор використовувати, залежить від системи експресії та багатьох інших факторів. Відповідний вектор експресії сприятиме успішній експресії цільового білка та, якщо необхідно, очищенню білка.
Штами BL21 і BL21-Gold забезпечують найсуворіший контроль експресії білка для надзвичайно токсичних білків.
Під час індукції IPTG клітини повинні виробляти Т7 РНК-полімеразу, необхідну для транскрипції генів; наприклад, ви можете використовувати штам E. coli BL21(DE3). BL21(DE3) містить ген lac, що кодує репресор lac, LacI. Після індукції IPTG цей штам експресує РНК-полімеразу Т7.