Перенесіть елюовану малу РНК у свіжі пробірки (до 700 мкл на пробірку). Додайте 10 мкг глікогену та принаймні 1 об’єм ізопропанолу. Осадіть очищену малу РНК при -80°C до заморожування або при -20°C протягом 30 хв.. Промийте один раз 70% етанолом і висушіть осад.
Після регулювання концентрації солі РНК може випадати в осад додавання 2,5 об’ємів етанолу або 1 об’єму ізопропанолу та ретельне перемішування з подальшим охолодженням протягом щонайменше 15 хвилин при –20°C. Роль ізопропанолу в ізоляції РНК полягає в осадженні РНК.
Метод виділення малих РНК Зішкребти вміст скребком; і зберіть зразки в 1,5-мл пробірки. Залиште зразки на 5 хв при кімнатній температурі. До кожного зразка додають 200 мкл хлороформу, ретельно перемішують, перемішують протягом 30 с і залишають на 3 хв при кімнатній температурі. Центрифугуйте пробірки при 12 000 g протягом 15 хвилин при 4°C.
Преципітація РНК с етанол (або ізопропанол) є стандартним методом відновлення РНК із водних розчинів.
Цей протокол можна використовувати для осадження РНК, щоб очистити її після екстракції або концентрувати. Ацетат натрію високоефективний при осадженні нуклеїнових кислот і є найбільш універсальною сіллю, оскільки він не пригнічує багато реакцій, які часто виконуються з очищеними РНК..
Концентрація РНК 10 мкг/мл зазвичай може бути осаджена від кількох годин до ночі без труднощів, але при нижчих концентраціях необхідно додати нуклеїнову кислоту-носій або глікоген, щоб сприяти преципітації та максимальному відновленню.