Як визначити, 5 чи 3 виступає?

Якщо одноланцюгові основи закінчуються 5'-фосфатом, кажуть, що фермент залишає 5'-виступ. 3'-нависання – ферменти рестрикції, які асиметрично розщеплюють ДНК, залишають одноланцюгові основи. Якщо одноланцюгові основи закінчуються 3'-гідроксилом, кажуть, що фермент залишає 3'-виступ.

Липкі кінці відомі як когезивні/нетупі кінці. RE (EcoRI-hf і BamHI-hf) розрізають ланцюги ДНК на відстані кількох пар основ одна від одної. Це різання призводить до утворення 5′- або 3′- неспарених ланцюгів ДНК. Ми називаємо їх 5′- (5 простих) або 3′ (3 простих) виступів.

Якщо у вас є особливі вимоги щодо збереження послідовності на місці притуплення, і вам потрібно переварити 5´ звис, ви можете використовуйте нуклеазу Mung Bean для розкладання в напрямку від 5´ до 3´. Ми рекомендуємо використовувати цей фермент лише в цьому випадку.

EcoRI створює 4 нуклеотидні липкі кінці з 5' кінцеві звиси з AATT. Послідовність розпізнавання нуклеїнової кислоти, де фермент розрізає, є G↓AATTC, яка має паліндромну комплементарну послідовність CTTAA↓G. Інші ферменти рестрикції, залежно від місць розрізу, також можуть залишати 3' виступи або тупі кінці без виступів.

Звис є ділянка неспарених нуклеотидів на кінці молекули ДНК. Ці неспарені нуклеотиди можуть бути в будь-якому ланцюзі, утворюючи 3' або 5' виступи. Довші виступи називаються когезивними кінцями або липкими кінцями. Найчастіше вони утворюються ендонуклеазами рестрикції, коли вони розрізають ДНК.

Якщо одноланцюгові основи закінчуються 5'-фосфатом, кажуть, що фермент залишає 5'-виступ. 3'-нависання – ферменти рестрикції, які асиметрично розщеплюють ДНК, залишають одноланцюгові основи. Якщо одноланцюгові основи закінчуються 3'-гідроксилом, кажуть, що фермент залишає 3'-виступ.