Амінреактивні барвники, також відомі як LIVE/DEAD® плями мертвих клітин, що фіксуються, є клас життєздатних барвників, придатних для ідентифікації мертвих клітин у зразках, які будуть фіксовані. Ці барвники проникають через клітинні мембрани мертвих клітин і реагують з вільними амінами в цитоплазмі.
Гнучкість — 14 різних ЖИВИХ/МЕРТВИХ барвників, що збуджуються УФ-лазерами, 405, 488, 532, 561, 633 або 808 нм, і вибір випромінювання на різні канали. Надійний — зберігається чітке розрізнення живих і мертвих клітин до 30 днів після фіксації.
Користь цих барвників полягає в тому як тільки клітини пофарбовані барвниками для життєздатності, їх можна зафіксувати (їх також можна використовувати нефіксованими) без будь-якого зменшення роздільної здатності між живими та мертвими клітинами.
CytoCalcein™ Green є флуорогенним субстратом естерази, який позначає зеленою флуоресценцією живі клітини, що виявляють активність естерази. У той же час йодид пропідію є непроникною для мембрани фарбою нуклеїнової кислоти, яка позначає мертві клітини червоною флуоресценцією.
Протокол
- Розморозити флакон з барвником.
- Розведіть фіксовану пляму мертвих клітин LIVE/DEAD, додавши 50 мкл ДМСО у флакон.
- Додайте 1 мл клітин у пробірку проточного цитометра в буфері, що не містить білка.
- Додайте 1 мкл розведеної фарби до клітин.
- Змішайте клітини та пофарбуйте.
- Витримати 30 хвилин.
- Промити клітини.
- Аналіз на проточному цитометрі.