Є принаймні три контролі трансфекції, які повинні бути включені в кожну чашку для трансфекції: позитивний контроль, негативний контроль і необроблений контроль. Трансфекція позитивного контролю гарантує, що система, яка використовується, працює, а умови доставки оптимальні. 12 травня 2017 р.
Фактори, що впливають на ефективність трансфекції. З будь-яким реагентом або методом трансфекції, стан клітин, ступінь злиття, кількість пасажів, забруднення, якість і кількість ДНК є важливими параметрами, які можуть значно впливати на ефективність трансфекції.
Для оптимальних результатів трансфекції, дотримуйтеся звичайної процедури субкультивування та пасажуйте культури один або два рази на тиждень у такому розведенні, яке дозволяє їм стати майже конфлюентними перед наступним пасажем. Не дозволяйте клітинам залишатися злитими більше 24 годин.
Ефективність трансфекції = Кількість експресуючих клітин ÷ загальна кількість клітин. Для експериментів з нокдауном або нокаутом розрахунок буде таким: 1 – (кількість експресуючих клітин ÷ загальна кількість клітин). Те, що вважається «експресією», буде відрізнятися залежно від методу аналізу, досліджуваного гена та експериментальних цілей.
Позитивний контроль. Перевірені siRNA для досягнення високих рівнів нокдауну для забезпечення оптимальних умов трансфекції. Зазвичай вони націлені на конститутивно експресований ген для використання в широкому діапазоні типів клітин. Флуоресцентні контролі трансфекції.
Є принаймні три контролі трансфекції, які повинні бути включені в кожну чашку для трансфекції: позитивний контроль, негативний контроль і необроблений контроль. Трансфекція позитивного контролю гарантує, що система, яка використовується, працює, а умови доставки є оптимальними.