Щоб уникнути пошкодження клітини під час заморожування, до середовища росту, в якому клітини заморожуються, додають кріопротектор. Гліцерин або ДМСО (диметилсульфоксид) у 10% концентрації використовується найчастіше.
Середовище для заморожування має містити відповідну концентрацію ДМСО або інших кріопротекторів для захисту ваших клітин під час процесу заморожування. Концентрація ДМСО може змінюватися в залежності від типу клітини, але типова концентрація становить 5-10%.
ДМСО зазвичай додають до середовища, що використовується для заморожування клітин, у концентрації від 5–10% щоб захистити їх від суворих умов.
Найпоширенішим середовищем для заморожування є 90% FBS/10% DMSO. Для менш вибагливих клітин і для бюджетної культури тканин також можна використовувати 10% ДМСО в середовищі росту клітин. Після центрифугування ресуспендуйте клітинний осад в 1 мл середовища для заморожування на кріопробірку. Переконайтеся, що у вас є кріопробірки, призначені для зберігання рідкого N2.
Клітини слід заморожувати повільно зі швидкістю 1°C/хв. Цього можна досягти за допомогою програмованого охолоджувача або помістивши флакони в ізольовану коробку, поміщену в морозильну камеру з температурою від –70 °C до –90 °C, а потім перемістивши їх у сховище рідкого азоту.
Результати: результати показали це ДМСО мав значну токсичність і пригнічення проліферації на 4 клітинних лініях, при концентраціях 10%, 5%, 2,5% і 1,25% (p<0,0001). Метанол і етанол інгібували клітинну проліферацію в концентраціях 10% і 5% (p<0,0001).